Kaedah Colorimetric - analisis berdasarkan perbandingan ketepuan warna bahan yang disiasat dan diketahui. Keputusan ujian fizikal dan kimia sangat bernilai untuk banyak cabang sains, tetapi kebanyakan daripada semua penyelidikan digunakan dalam perubatan.
Intipati kaedah kolorimetrik
Terdapat banyak jenis ujian yang menentukan komposisi kimia bahan. Sebahagian daripada mereka adalah universal dan digunakan secara meluas dalam pelbagai bidang, yang lain adalah khusus, dengan ketepatan yang lebih tinggi. Kaedah kolorimetrik adalah universal.
Intipati analisis terletak pada fakta bahawa ketepuan warna larutan dengan kepekatan yang tidak diketahui dibandingkan dengan warna larutan piawai. Semasa analisis, hasil daripada interaksi komponen yang disiasat dengan reagen tertentu, sebatian berwarna terbentuk. Selepas selesai tindak balas, naungan yang terhasil dibandingkan dengan warna larutan, yang kepekatannya sudah diketahui.
Adalah dipercayai bahawa pengasas kolorimetri ialah Robert Boyle. Dia menggunakan picittannin untuk membezakan besi daripada kuprum dalam larutan. Boylelah yang perasan bahawa semakin besar kepekatan besi dalam larutan, semakin kaya nada larutan tersebut.
Colorimetri
Colorimetri ialah kaedah untuk menentukan jumlah bahan dalam larutan. Analisis adalah berdasarkan undang-undang Bouguer-Lambert-Beer: apabila pancaran cahaya mengenai lapisan penyerap padat bahan, keamatannya menjadi lemah.
Kaedah kolorimetrik untuk menentukan kepekatan bahan boleh menggunakan perbandingan visual atau perbandingan menggunakan instrumen khas untuk mengukur keamatan warna. Perbandingan dibuat secara langsung dan memberi pampasan.
- Lurus. Kaedah ini melibatkan membandingkan tahap warna larutan ujian pada ketumpatan dan suhu tertentu cecair dengan larutan rujukan. Apabila menggunakan fotokolorimeter dan spektrofotometer, air suling digunakan sebagai penyelesaian rujukan. Peranti mengukur keamatan arus, yang bergantung pada keamatan cahaya.
- Pampasan. Kaedah ini adalah berdasarkan membawa warna sampel yang dikaji kepada rujukan. Hasilnya dicapai dengan menambahkan pelarut atau meningkatkan ketinggian lapisan medium yang diwarnakan.
Penggunaan spektrofotometer, monokromator dan instrumen ketepatan lain memudahkan lagi kaedah penyelidikan yang sedia mudah dan membolehkan anda meningkatkan ketepatan keputusan. Peranti ini dapat mengukur jumlah penghantaran cahaya dan menentukan panjang gelombang.
Tempat analisis digunakan
Kaedah analisis kolorimetrik digunakan apabila komposisi kimia yang tepat diketahui, terdapat sampel rujukan untuk perbandingan, dan suhu ujian dan sampel rujukan adalah sama. Jika anda perlu menentukan jumlah bahan berwarna dengan cepat, tetapi ia sangat kecil sehingga mustahil untuk menggunakan kaedah analisis.
Colorimetry digunakan secara meluas dalam perubatan untuk penyelidikan biokimia klinikal dan bidang lain:
- industri farmaseutikal;
- industri makanan dan alkohol;
- agronomi (penentuan kualiti tanah).
Kebaikan dan keburukan
Kaedah kolorimetrik, seperti yang lain, mempunyai kebaikan dan keburukan.
Kelebihan termasuk yang berikut:
- kemudahan analisis, prosedur persediaan minimum;
- kemungkinan ujian walaupun dengan sedikit bahan ujian;
- tidak perlu peralatan mahal, walaupun peranti moden yang tidak murah semakin digunakan sejak kebelakangan ini. Tetapi mereka memberikan hasil yang paling tepat.
Kelemahan: ketepatan analisis yang rendah berbanding kaedah analisis.
Kaedah biuret untuk penentuan protein
Protein dalam serum darah adalah penunjuk yang mencerminkan keadaan homeostasis. Peningkatan kepekatan sebatian makromolekul dalam darah dipanggil hiperproteinemia, kandungan rendah dipanggil hipoproteinemia.
Protein dalamserum darah mempunyai komposisi, struktur, sifat yang berbeza, melaksanakan fungsi yang berbeza. Mereka dibahagikan kepada enzim, hormon, imunoglobulin dan lain-lain. Semua kumpulan protein mempunyai beberapa ciri umum, berdasarkan kaedah yang telah dibangunkan untuk penentuan sebatian organik makromolekul dalam cecair biologi.
Daripada semua kaedah dalam biokimia klinikal, kaedah kolorimetrik untuk menentukan protein paling kerap digunakan. Mereka agak murah, yang penting untuk organisasi belanjawan. dan agak mudah. Yang paling biasa ialah kaedah biuret. Intipati kaedah: protein dalam persekitaran alkali bertindak balas dengan kuprum sulfat dan membentuk sebatian ungu. Kandungan protein dalam darah ditentukan oleh ketepuan pewarnaan. Biobahan untuk analisis diambil pada waktu pagi semasa perut kosong.
Analisis sangat tepat, tetapi terdapat faktor yang mempengaruhi kepekatan protein dalam darah:
- aktiviti fizikal sejurus sebelum pensampelan biomaterial;
- minggu terakhir kehamilan dan penyusuan;
- penggunaan ubat Corticotropin, Miscleron, Clofibrate meningkatkan kandungan protein dalam darah, dan penggunaan Pyrazinamide dan estrogen - untuk mengurangkan kepekatan;
- kedudukan tangan yang salah semasa pensampelan biomaterial.
Penentuan besi
Jumlah zat besi dalam darah adalah salah satu petunjuk utama dalam diagnosis pelbagai penyakit. Bahan ini tertumpu pada hemoglobin, yang memastikan pengangkutan oksigen ke tisu. Untukpenentuan besi dengan kaedah kolorimetrik, selalunya, larutan bathophenanthroline (0.02%) digunakan sebagai reagen utama. Biomaterial - serum tanpa kesan hemolisis.
Intipati kaedah: interaksi ion ferus dan bathophenanthroline sulfat membentuk kompleks berwarna, ketepuannya ditentukan secara fotometrik. Untuk mendapatkan penyelesaian yang jelas, adalah perlu untuk mengikuti peraturan untuk pensampelan biomaterial, tetapi untuk menentukan dengan tepat ketumpatan optik kompleks ligan besi, besi dilepaskan daripada hemoglobin menggunakan hidroksilamin dan detergen (natrium dodecyl sulfate). Keputusan ujian menentukan kehadiran dan tahap patologi. Kepekatan besi normal hendaklah:
- 14, 2 – 26.0 µmol/L (lelaki);
- 10, 6- 21, 7 µmol/L (wanita).
Kekurangan zat besi biasanya dikaitkan dengan kehilangan darah, pengambilan diet yang tidak mencukupi atau penyerapan yang lemah daripada saluran gastrousus.
Ujian kolesterol
Kolesterol ialah bahan organik yang terdapat dalam dinding sel banyak organisma, termasuk manusia. Ia perlu untuk pengeluaran hormon kolekalsiferol dan steroid. Tahap kolesterol 3.37-5.2 mmol/L dianggap normal. Kandungan tinggi adalah salah satu punca utama aterosklerosis.
Kaedah kolorimetrik untuk menentukan kolesterol membolehkan anda mengenali penyakit vaskular pada peringkat awal. Menurut keputusan patoanatomi dalam hasil maut iskemia, kepekatan alkohol lipofilik pada pesakitialah 6.5-7.8 mmol/L.
Prinsip kaedah kolorimetrik ialah kolesterol dioksidakan oleh 3beta-hydroxy-steroid oxidoreductase, membebaskan hidrogen peroksida, yang menukar p-aminoatipyrine kepada sebatian berwarna. Kandungan kolesterol ditentukan oleh ketepuan warnanya.
Apabila menjalankan ujian pada kanak-kanak, ia mesti diambil kira bahawa kepekatan kolesterol pada zaman kanak-kanak tidak boleh melebihi 4.1 mmol / l.
Apakah kaedah kolorimetri enzimatik?
Ujian enzimatik adalah berdasarkan penggunaan tindak balas oleh enzim yang mempunyai aktiviti tinggi. Ia digunakan secara meluas dalam kimia analitik untuk menentukan pelbagai bahan - daripada ion nitrat kepada makromolekul.
Kaedah enzimatik (enzimatik) adalah khusus, membenarkan analisis bahan tertentu dengan kehadiran bahan lain yang serupa dalam komposisi. Kaedah yang paling biasa berdasarkan penggunaan enzim - glukosa oksidase. Ujian ini digunakan untuk menentukan kepekatan glukosa dalam darah. Ketepatan ujian membolehkan ia digunakan untuk melaraskan dos ejen hipoglisemik pada pesakit diabetes jenis 2.
Kaedah pengoksidaan glukosa dianggap sebagai salah satu kaedah kuantitatif terbaik untuk menentukan glukosa. Kedua-dua darah (kapilari) dan serum boleh digunakan sebagai biomaterial, tetapi plasma lebih disukai kerana ia mempunyai kandungan hematokrit yang lebih rendah, yang menjejaskan ketepatan keputusan secara negatif.
Kaedah kinetik fotometri digunakan terutamanya. Intipatinya terletak pada hakikat bahawanisbah glukosa oksidase dan peroksidase yang ditetapkan, untuk jangka masa tertentu selepas permulaan tindak balas, kadar pembentukan sebatian berwarna akan sepadan dengan tahap glukosa dalam sampel. Kelebihan utama ujian adalah bahawa hasilnya tidak dipengaruhi oleh kehadiran sebatian pihak ketiga dalam sampel. Kaedah ini juga mempunyai kelemahan - alat pengukur mahal daripada pengeluar Jerman atau Sweden diperlukan untuk ujian.
Kesimpulan
Kaedah kolorimetrik adalah tepat dan mudah digunakan. Penggunaannya dalam perubatan membolehkan pengesanan awal pelbagai perubahan patologi dalam badan. Dengan pengenalan teknologi baharu, kaedah ini sedang ditambah baik dan semakin popular.
