Kajian bakteria adalah sangat penting untuk manusia. Sehingga kini, sebilangan besar prokariot telah ditemui, yang berbeza antara satu sama lain dalam sifat patogenik, kawasan pengedaran, bentuk, saiz, bilangan flagela, dan parameter lain. Untuk mengkaji strain ini secara terperinci, kaedah penyelidikan bakteriologi digunakan.
Apakah kaedah untuk menganalisis sel bakteria?
Untuk menentukan sama ada bakteria adalah patogen, kultur diperiksa dalam pelbagai cara. Antaranya:
1. Kaedah bakteria.
2. Kaedah bakteriologi.
3. Kaedah biologi.
Kaedah penyelidikan bakteria dan bakteriologi adalah berdasarkan secara langsung bekerja dengan sel prokariotik, apabila analisis biologi diperlukan untuk mengkaji kesan sel tersebut pada organisma hidup haiwan eksperimen. Mengikut tahap manifestasi tanda-tanda penyakit tertentu, saintis boleh membuatkesimpulan tentang kehadiran atau ketiadaan bakteria patogen dalam sampel, serta membiaknya secara semula jadi dalam badan haiwan untuk mendapatkan budaya dan penggunaannya dalam kerja lain.
Kaedah penyelidikan bakteriologi berbeza daripada bakterioskopi. Pada yang pertama, kultur prokariot hidup yang disediakan khas digunakan untuk analisis, manakala yang kedua, kerja dijalankan dengan sel mati atau hidup pada slaid kaca.
Peringkat kaedah penyelidikan bakteriologi. Mikrobiologi
Prinsip mengkaji sifat-sifat kultur bakteria boleh berguna untuk ahli mikrobiologi yang telah menetapkan matlamat untuk mengkaji sel prokariotik, dan untuk juruteknik makmal yang tugasnya adalah untuk menubuhkan kepatogenisitas atau ketakpatogenan bakteria, dan kemudian diagnosis pesakit.
Kaedah mengkaji bakteria terbahagi kepada tiga peringkat:
1. Pengasingan bakteria daripada sampel asal.
2. Menyemai bakteria dan mengembangkan budaya tulen, mengkaji sifatnya.
3. Kajian terperinci tentang sel bakteria.
Peringkat pertama
Sampel, atau smear, diambil dari permukaan bebas medium atau dari pesakit. Oleh itu, kita mendapat "koktail" pelbagai jenis bakteria yang mesti disemai pada medium nutrien. Kadangkala ia menjadi mungkin untuk mengasingkan bakteria yang diperlukan dengan segera, mengetahui fokus pengedarannya dalam badan.
Selepas dua atau tiga hari, koloni yang dikehendaki dipilih dandisemai pada media pepejal cawan Petri dengan bantuan gelung steril. Banyak makmal berfungsi dengan tabung uji, yang boleh mengandungi media nutrien pepejal atau cecair. Beginilah kaedah penyelidikan bakteriologi dalam mikrobiologi dijalankan.
Peringkat kedua
Selepas mendapatkan koloni individu bakteria, analisis makro dan mikro secara langsung dijalankan. Semua parameter koloni diukur, warna dan bentuk setiap jajahan ditentukan. Ia bukan perkara biasa untuk mengira koloni pada hidangan Petri dan kemudian dalam bahan permulaan. Ini penting dalam analisis bakteria patogen, yang bilangannya bergantung pada tahap penyakit.
Kaedah penyelidikan bakteriologi, peringkat ke-2 ialah mengkaji koloni individu mikroorganisma, boleh dikaitkan dengan kaedah biologi untuk menganalisis bakteria. Satu lagi matlamat bekerja pada peringkat ini adalah untuk meningkatkan jumlah bahan sumber. Ini boleh dilakukan pada medium nutrien, atau anda boleh menjalankan eksperimen in vivo pada organisma eksperimen hidup. Bakteria patogen akan membiak, dan akibatnya, darah akan mengandungi berjuta-juta sel prokariotik. Mudah untuk menyediakan bahan kerja bakteria yang diperlukan daripada darah yang diambil.
Peringkat ketiga
Bahagian kajian yang paling penting ialah penentuan sifat morfologi, biokimia, toksigenik dan antigenik kultur bakteria. Kerja dijalankan dengan kultur pra-bersih pada medium nutrien, serta dengan penyediaan (sering diwarnakan) di bawah mikroskop.
Tetapkan pemilikanbakteria patogen atau oportunistik kepada satu atau kumpulan sistematik yang lain, serta untuk menentukan ketahanan mereka terhadap ubat-ubatan, membolehkan kaedah penyelidikan bakteriologi. Peringkat 3 - antibiotik, iaitu analisis kelakuan sel bakteria dalam keadaan kandungan ubat di persekitaran.
Kajian tentang kerintangan antibiotik bagi sesuatu budaya adalah amat penting secara praktikal apabila perlu untuk menetapkan ubat yang diperlukan, dan yang paling penting, ubat yang berkesan untuk pesakit tertentu. Di sinilah kaedah penyelidikan bakteriologi boleh membantu.
Apakah itu medium pertumbuhan?
Untuk pembangunan dan pembiakan, bakteria mesti berada dalam media nutrien yang telah disediakan terlebih dahulu. Mengikut konsistensi, ia boleh menjadi cecair atau pepejal, dan mengikut asal - sayuran atau haiwan.
Keperluan media asas:
1. Kemandulan.
2. Ketelusan maksimum.
3. Penunjuk optimum keasidan, tekanan osmotik, aktiviti air dan nilai biologi lain.
Mendapatkan koloni terpencil
1. Kaedah Drygalsky. Ia terdiri daripada fakta bahawa sapuan dengan pelbagai jenis mikroorganisma digunakan pada gelung bakteria. Gelung ini disalurkan di sepanjang cawan Petri pertama dengan medium nutrien. Selanjutnya, tanpa mengubah gelung, kaedah bahan sisa dijalankan pada hidangan Petri kedua dan ketiga. Jadi, pada sampel terakhir koloni, bakteria tidak akan dibiji terlalu padat, dengan itu memudahkan keupayaan untuk mencari yang diperlukan untuk bekerja.bakteria.
2. Kaedah Koch. Ia menggunakan tabung uji dengan medium nutrien cair. Gelung atau pipet dengan sapuan bakteria diletakkan di sana, selepas itu kandungan tiub uji dituangkan ke atas pinggan khas. Agar (atau gelatin) menjadi pejal selepas beberapa lama, dan mudah untuk mencari koloni sel yang dikehendaki dalam ketebalannya. Adalah penting untuk mencairkan campuran bakteria dalam tabung uji sebelum memulakan kerja supaya kepekatan mikroorganisma tidak terlalu tinggi.
Kaedah penyelidikan bakteriologi, peringkatnya berdasarkan pengasingan kultur bakteria yang dikehendaki, tidak boleh dilakukan tanpa kedua-dua kaedah ini untuk mencari koloni terpencil.
Antibiogram
Secara visual, tindak balas bakteria terhadap ubat boleh dilihat dalam dua cara praktikal:
1. Kaedah cakera kertas.
2. Membiak bakteria dan antibiotik dalam medium cecair.
Kaedah cakera kertas memerlukan kultur mikroorganisma yang telah ditanam pada medium nutrien pepejal. Pada medium sedemikian letakkan beberapa keping kertas bulat yang direndam dalam antibiotik. Sekiranya ubat itu berjaya mengatasi peneutralan sel bakteria, selepas rawatan sedemikian akan ada kawasan yang tidak mempunyai koloni. Jika tindak balas terhadap antibiotik negatif, bakteria akan terus hidup.
Dalam kes menggunakan medium nutrien cecair, sediakan dahulu beberapa tabung uji dengan kultur bakteria pencairan yang berbeza. Antibiotik ditambah ke dalam tabung uji ini, dan proses interaksi antara bahan dan mikroorganisma diperhatikan pada siang hari. Akibatnya, antibiogram berkualiti tinggi diperolehi, mengikut mana ia adalah mungkin untukmenilai keberkesanan ubat untuk tanaman tertentu.
Tugas utama analisis
Di sini disenaraikan matlamat dan peringkat kaedah penyelidikan bakteriologi.
1. Dapatkan bahan permulaan yang akan digunakan untuk mengasingkan koloni bakteria. Ia boleh menjadi sapuan dari permukaan mana-mana objek, membran mukus atau rongga organ manusia, ujian darah.
2. Penanaman kultur pada medium nutrien pepejal. Selepas 24-48 jam, koloni pelbagai jenis bakteria boleh ditemui pada hidangan Petri. Kami memilih yang dikehendaki mengikut kriteria morfologi dan / atau biokimia dan menjalankan kerja selanjutnya dengannya.
3. Penyebaran budaya yang terhasil. Kaedah penyelidikan bakteriologi boleh berdasarkan kaedah mekanikal atau biologi untuk meningkatkan bilangan kultur bakteria. Dalam kes pertama, kerja dijalankan dengan media nutrien pepejal atau cecair, di mana bakteria membiak dalam termostat dan membentuk koloni baru. Kaedah biologi memerlukan keadaan semula jadi untuk meningkatkan bilangan bakteria, jadi di sini haiwan eksperimen menjadi dijangkiti dengan mikroorganisma. Selepas beberapa hari, banyak prokariot boleh ditemui dalam sampel darah atau smear.
4. Bekerja dengan budaya yang disucikan. Untuk menentukan kedudukan sistematik bakteria, serta kepunyaan mereka kepada patogen, adalah perlu untuk menjalankan analisis menyeluruh sel mengikut ciri morfologi dan biokimia. Apabila mengkaji kumpulan mikroorganisma patogenik, adalah penting untuk mengetahuisejauh mana keberkesanan antibiotik.
Ini adalah ciri umum kaedah penyelidikan bakteriologi.
Ciri analisis
Peraturan utama penyelidikan bakteriologi ialah kemandulan maksimum. Jika anda bekerja dengan tabung uji, kultur dan subkultur bakteria hendaklah dijalankan hanya di atas lampu semangat yang dipanaskan.
Semua peringkat kaedah penyelidikan bakteriologi memerlukan penggunaan gelung khas atau pipet Pasteur. Kedua-dua alatan mesti dirawat terlebih dahulu dalam nyalaan lampu alkohol. Bagi pipet Pasteur, di sini, sebelum pensterilan terma, adalah perlu untuk memutuskan hujung pipet dengan pinset.
Teknik pembenihan bakteria juga mempunyai ciri tersendiri. Pertama, apabila menyuntik pada media pepejal, gelung bakteria disalurkan ke atas permukaan agar. Gelung itu, sudah tentu, sepatutnya sudah mempunyai sampel mikroorganisma di permukaan. Inokulasi ke dalam medium kultur juga diamalkan, dalam keadaan ini gelung atau pipet harus sampai ke bahagian bawah piring Petri.
Apabila bekerja dengan media cecair, tabung uji digunakan. Di sini adalah penting untuk memastikan cecair tidak menyentuh tepi alat kaca atau penyumbat makmal, dan instrumen yang digunakan (pipet, gelung) tidak menyentuh objek dan permukaan asing.
Kepentingan kaedah penyelidikan biologi
Analisis sampel bakteria mempunyai aplikasi praktikalnya. terutamanyakaedah penyelidikan bakteriologi boleh digunakan dalam perubatan. Sebagai contoh, adalah perlu untuk mengkaji mikroflora pesakit untuk menubuhkan diagnosis yang betul, serta untuk membangunkan rawatan yang betul. Antibiogram membantu di sini, yang akan menunjukkan aktiviti ubat terhadap patogen.
Analisis bakteria digunakan di makmal untuk mengesan penyakit berbahaya seperti batuk kering, demam berulang atau gonorea. Ia juga digunakan untuk mengkaji komposisi bakteria tonsil, rongga organ.
Kaedah penyelidikan bakteriologi boleh digunakan untuk menentukan pencemaran alam sekitar. Menurut data tentang komposisi kuantitatif dan kualitatif sapuan dari permukaan objek, tahap populasi persekitaran ini oleh mikroorganisma ditentukan.
