Diagnosis makmal bagi hampir semua penyakit berjangkit adalah berdasarkan pengesanan antibodi dalam darah pesakit, yang dihasilkan terhadap antigen patogen, melalui kaedah tindak balas serologi. Mereka memasuki amalan perubatan dari akhir abad kesembilan belas hingga awal abad kedua puluh.
Perkembangan sains telah membantu menentukan struktur antigen mikrob dan formula kimia toksinnya. Ini memungkinkan untuk mencipta bukan sahaja terapeutik, tetapi juga sera diagnostik. Ia diperoleh dengan mentadbir patogen yang dilemahkan kepada haiwan makmal. Selepas beberapa hari pendedahan, darah arnab atau tikus digunakan untuk menyediakan persediaan yang digunakan untuk mengenal pasti mikrob atau toksinnya menggunakan ujian serologi.
Manifestasi luaran tindak balas sedemikian bergantung pada keadaan penetapannya dan pada keadaan antigen dalam darah pesakit. Jika zarah mikrob tidak larut, ia memendakan, melisiskan, mengikat atau tidak bergerak dalam serum. Jika antigen larut, maka fenomena peneutralan atau pemendakan muncul.
Tindak balas aglutinasi (RA)
Ujian aglutinasi serologi adalah sangat spesifik. Ia mudah dilakukan dan agakvisual, untuk menentukan dengan cepat kehadiran antigen dalam serum darah pesakit. Ia digunakan untuk menguji tindak balas Vidal (diagnosis demam kepialu dan paratifoid) dan Weigl (demam kepialu).
Ia berdasarkan interaksi khusus antara antibodi manusia (atau aglutinin) dan sel mikrob (agglutenogens). Selepas interaksi mereka, zarah terbentuk yang mendakan. Ini adalah petanda positif. Ejen mikrob hidup atau mati, kulat, protozoa, sel darah dan sel somatik boleh digunakan untuk menyediakan tindak balas.
Secara kimia, tindak balas dibahagikan kepada dua langkah:
- Sambungan khusus antibodi (AT) dengan antigen (AG).
- Tidak khusus - pemendakan konglomerat AG-AT, iaitu pembentukan aglutinat.
Tindak Balas Pengagregatan Tidak Langsung (IPHA)
Tindak balas ini lebih sensitif daripada yang sebelumnya. Ia digunakan untuk mendiagnosis penyakit yang disebabkan oleh bakteria, parasit intraselular, dan protozoa. Ia sangat spesifik sehinggakan kepekatan antibodi yang sangat rendah pun boleh dikesan.
Eritrosit biri-biri yang telah disucikan dan sel darah merah manusia yang telah dirawat terlebih dahulu dengan antibodi atau antigen digunakan untuk penghasilannya (bergantung pada perkara yang ingin dicari oleh juruteknik makmal). Dalam sesetengah kes, sel darah merah manusia dirawat dengan imunoglobulin. Tindak balas serologi eritrosit dianggap telah berlaku jika ia telah mendap di bahagian bawah tiub. Mengenai reaksi positifkatakan apabila sel-sel disusun dalam bentuk payung terbalik, menduduki seluruh bahagian bawah. Tindak balas negatif dikira jika eritrosit mendap dalam lajur atau dalam bentuk butang di tengah bahagian bawah.
Tindak balas pemendakan (RP)
Tindak balas serologi jenis ini digunakan untuk mengesan zarah antigen yang sangat kecil. Ini boleh, sebagai contoh, protein (atau bahagiannya), sebatian protein dengan lipid atau karbohidrat, bahagian bakteria, toksinnya.
Sera untuk tindak balas diperolehi oleh haiwan yang menjangkiti secara buatan, biasanya arnab. Dengan kaedah ini, anda boleh mendapatkan sebarang serum pemendakan. Penetapan tindak balas pemendakan serologi adalah serupa dalam mekanisme tindakan kepada tindak balas aglutinasi. Antibodi yang terkandung dalam serum bergabung dengan antigen dalam larutan koloid, membentuk molekul protein besar yang didepositkan di bahagian bawah tiub atau pada substrat (gel). Kaedah ini dianggap sangat khusus dan boleh mengesan walaupun jumlah bahan yang boleh diabaikan.
Digunakan untuk mendiagnosis wabak, tularemia, antraks, meningitis dan penyakit lain. Selain itu, dia terlibat dalam pemeriksaan perubatan forensik.
Tindak balas pemendakan gel
Tindak balas serologi boleh dilakukan bukan sahaja dalam medium cecair, tetapi juga dalam gel agar. Ini dipanggil kaedah pemendakan meresap. Dengan bantuannya, komposisi campuran antigen kompleks dikaji. Kaedah ini berdasarkan chemotaxis antigen kepada antibodi dan sebaliknya. Dalam gel mereka bergerakke arah satu sama lain pada kelajuan yang berbeza dan, bertemu, membentuk garis kerpasan. Setiap baris ialah satu set AG-AT.
Tindak balas peneutralan eksotoksin dengan antitoksin (PH)
Serum antitoksik mampu meneutralkan tindakan eksotoksin yang dihasilkan oleh mikroorganisma. Reaksi serologi ini berdasarkan ini. Mikrobiologi menggunakan kaedah ini untuk mentitrasi sera, toksin dan toksoid dan menentukan aktiviti terapeutiknya. Kuasa peneutralan toksin ditentukan oleh unit konvensional - AE.
Selain itu, terima kasih kepada tindak balas ini, adalah mungkin untuk menentukan spesies atau jenis eksotoksin. Ini digunakan dalam diagnosis tetanus, difteria, botulisme. Kajian ini boleh dilakukan "pada kaca" dan dalam gel.
Tindak balas lisis (RL)
Serum imun, yang memasuki badan pesakit, mempunyai, sebagai tambahan kepada fungsi utama imuniti pasif, juga sifat lisis. Ia mampu melarutkan agen mikrob, unsur asing selular dan virus yang masuk ke dalam badan pesakit. Bergantung pada kekhususan antibodi yang termasuk dalam serum, bacteriolysins, cytolysins, spirochetolizins, hemolysins dan lain-lain diasingkan.
Antibodi khusus ini dipanggil "pelengkap". Ia ditemui dalam hampir semua cecair badan manusia, mempunyai struktur protein yang kompleks dan sangat sensitif terhadap kenaikan suhu, gegaran, asid dan cahaya matahari langsung. Tetapi dalam keadaan kering ia dapat mengekalkansifat pemisahannya sehingga enam bulan.
Terdapat jenis tindak balas serologi jenis ini:
- bakteriolisis;
- hemolisis.
Bakteriolisis dijalankan menggunakan serum darah pesakit dan serum imun khusus dengan mikrob hidup. Jika cukup pelengkap hadir dalam darah, maka penyelidik akan melihat bakteria lisis, dan tindak balas akan dianggap positif.
Reaksi serologi kedua darah ialah penggantungan sel darah merah pesakit dirawat dengan serum yang mengandungi hemolysin, yang diaktifkan hanya dengan kehadiran pujian tertentu. Jika ada, maka pembantu makmal memerhatikan pembubaran sel darah merah. Tindak balas ini digunakan secara meluas dalam perubatan moden untuk menentukan titer pelengkap (iaitu, jumlah terkecilnya yang mencetuskan lisis eritrosit) dalam serum darah dan untuk melakukan analisis untuk penetapan pelengkap. Dengan cara ini ujian serologi untuk sifilis dijalankan - tindak balas Wasserman.
Tindak balas penetapan pelengkap (CFR)
Tindak balas ini digunakan untuk mengesan antibodi kepada agen berjangkit dalam serum darah pesakit, serta untuk mengenal pasti patogen melalui struktur antigennya.
Sehingga ke tahap ini, kami telah menerangkan tindak balas serologi yang mudah. RSK dianggap sebagai tindak balas yang kompleks, kerana bukan dua, tetapi tiga elemen berinteraksi di dalamnya: antibodi, antigen dan pelengkap. Intipatinya terletak pada fakta bahawa interaksi antara antibodi dan antigenberlaku hanya dengan kehadiran protein pelengkap, yang terserap pada permukaan kompleks AG-AT yang terbentuk.
Antigen itu sendiri, selepas penambahan pelengkap, mengalami perubahan ketara, yang menunjukkan kualiti tindak balas. Ia boleh menjadi lisis, hemolisis, imobilisasi, tindakan bakteria atau bakteriostatik.
Tindak balas itu sendiri berlaku dalam dua fasa:
- Pembentukan kompleks antigen-antibodi yang tidak dapat dilihat secara visual oleh pemeriksa.
- Perubahan dalam antigen di bawah tindakan pelengkap. Fasa ini paling kerap boleh dikesan dengan mata kasar. Jika tindak balas tidak dapat dilihat secara visual, maka sistem penunjuk tambahan digunakan untuk mengenal pasti perubahan.
Sistem penunjuk
Tindak balas ini berdasarkan penetapan pelengkap. Eritrosit ram yang telah dimurnikan dan serum hemolitik bebas pelengkap ditambah ke dalam tabung uji sejam selepas RSC ditetapkan. Jika pelengkap yang tidak terikat kekal di dalam tabung uji, maka ia akan bergabung dengan kompleks AG-AT yang terbentuk antara sel darah biri-biri dan hemolysin, dan menyebabkan ia larut. Ini bermakna RSK adalah negatif. Jika eritrosit kekal utuh, maka, oleh itu, tindak balas adalah positif.
Ujian Hemaglutinasi (RGA)
Terdapat dua tindak balas hemagglutinasi yang berbeza secara asasnya. Salah satunya adalah serologis, ia digunakan untuk menentukan kumpulan darah. Dalam kes ini, sel darah merah berinteraksi dengan antibodi.
Dan yang keduatindak balas tidak berlaku untuk serologi, kerana sel darah merah bertindak balas dengan hemagglutinin yang dihasilkan oleh virus. Memandangkan setiap patogen bertindak hanya pada eritrosit tertentu (ayam, kambing, monyet), tindak balas ini boleh dianggap sangat spesifik.
Anda boleh mengetahui sama ada tindak balas adalah positif atau negatif melalui lokasi sel darah di bahagian bawah tabung uji. Sekiranya corak mereka menyerupai payung terbalik, maka virus yang dikehendaki terdapat dalam darah pesakit. Dan jika semua eritrosit telah terbentuk seperti lajur syiling, maka tiada patogen yang diingini.
Ujian perencatan hemaglutinasi (HITA)
Ini adalah tindak balas yang sangat spesifik yang membolehkan anda menentukan jenis, jenis virus atau kehadiran antibodi khusus dalam serum darah pesakit.
Intipatinya terletak pada fakta bahawa antibodi yang ditambahkan pada tabung uji dengan bahan ujian menghalang pemendapan antigen pada eritrosit, dengan itu menghentikan hemagglutinasi. Ini adalah tanda kualitatif kehadiran dalam darah antigen khusus untuk virus khusus yang dicari.
Tindak balas imunofluoresensi (RIF)
Tindak balas adalah berdasarkan keupayaan untuk mengesan kompleks AG-AT dengan mikroskop pendarfluor selepas rawatannya dengan pewarna fluorochrome. Kaedah ini mudah dikendalikan, tidak memerlukan pengasingan budaya tulen dan mengambil sedikit masa. Ia amat diperlukan untuk diagnosis cepat penyakit berjangkit.
Dalam amalan, tindak balas serologi ini dibahagikan kepada dua jenis: langsung dan tidak langsung.
Direct RIF dihasilkan daripadaantigen, yang dirawat terlebih dahulu dengan serum pendarfluor. Dan yang tidak langsung ialah pertama ubat itu dirawat dengan diagnosticum konvensional yang mengandungi antigen untuk antibodi yang menarik, dan kemudian serum luminescent, yang khusus untuk protein kompleks AG-AT, digunakan semula, dan sel mikrob. menjadi kelihatan di bawah mikroskop.
