Baru-baru ini, kaedah yang boleh dipercayai, sangat sensitif dan pantas untuk mendiagnosis pelbagai penyakit berjangkit manusia telah dibangunkan. Kaedah ini dipanggil "analisis PCR". Apakah itu, apakah intipatinya, apakah mikroorganisma yang boleh didedahkan dan cara mengambilnya dengan betul, kami akan memberitahu dalam artikel kami.
Sejarah penemuan
Mencipta kaedah tindak balas rantai polimerase (PCR) oleh saintis Amerika Kary Mullis pada tahun 1983. Pada mulanya, kaedah diagnostik telah dipatenkan oleh Cetus Corporation, di mana penciptanya bekerja. Tetapi pada tahun 1992, semua hak dan paten telah dijual kepada Hoffman-La Roche. Selepas itu, ternyata kajian serupa dilakukan secara selari dan direkodkan oleh ahli biologi Amerika yang lain, seperti Alice Chen, David Edgar, John Trell. Pada tahun 1980, saintis Soviet A. Slyusarenko, A. Kaledin dan S. Gorodetsky turut menangani masalah ini. Oleh itu, adalah mustahil untuk menentukan pemegang hak cipta tunggal. Ramai ahli biokimia terkemuka telah membuat sumbangan tertentu kepada pembangunan teknik tindak balas rantai polimerase dan telah mematenkan inovasi mereka. Pada masa ini, analisisPCR dijalankan di mana-mana di makmal yang dilengkapi khas.
Intipati kaedah diagnostik PCR
Analisis PCR: apakah itu dan bagaimana ia berfungsi? Intipati kaedah ini adalah untuk meningkatkan jumlah persekitaran mikrob tertentu di bawah keadaan buatan menggunakan enzim polimerase DNA khas. Untuk ini, bahan DNA sedia ada didarab berkali-kali. Oleh itu, dengan kehadiran mikroorganisma patogen dalam sampel, jumlahnya akan meningkat disebabkan oleh manipulasi makmal biokimia, dan tidak sukar untuk mengesan bakteria di bawah mikroskop.
Bagaimanakah kajian bahan dilakukan?
Diperlukan untuk analisis:
- matriks DNA;
- primer yang menyambungkan hujung sekeping bahan;
- enzim polimerase DNA tahan haba;
- bahan kimia yang membuat enzim berfungsi dengan baik;
- penyelesaian penimbal yang diperlukan untuk mewujudkan keadaan yang sesuai untuk pertumbuhan dan perkembangan bahan DNA.
Untuk melakukan PCR, 25-30 ulangan dilakukan, terdiri daripada tiga peringkat: denaturasi, penyepuhlindapan dan pemanjangan.
Untuk analisis tindak balas rantai polimer, peranti khas digunakan - penguat. Peralatan moden membolehkan anda menetapkan program yang diperlukan untuk memanaskan dan menyejukkan tiub untuk menghapuskan ralat semasa diagnostik.
Di manakah diagnostik digunakan?
Kaedah tindak balas rantai polimer digunakan dalam pelbagai bidang perubatan:
- penjenayah dengania mengenal pasti bahan genetik seperti rambut, air liur atau darah;
- Ujian darah PCR membantu dengan genotaip, sebagai contoh, untuk mengesan tindak balas genetik individu terhadap ubat tertentu;
- menggunakan kaedah ini untuk mewujudkan kehadiran hubungan kekeluargaan antara orang;
- Kaedah PCR yang paling popular telah menjadi dalam diagnostik perubatan untuk menentukan pelbagai penyakit berjangkit.
Apakah jangkitan yang dikesan PCR?
Jadi, ubat telah lama dan berjaya menggunakan analisis PCR. Apa itu, kita sudah tahu. Dan apakah patogen yang boleh dikesan dengannya? Penyakit berjangkit berikut didiagnosis dengan kaedah PCR:
- hepatitis A, B, C;
- ureaplasmosis;
- candidiasis;
- chlamydia;
- mycoplasmosis;
- gardnerellosis;
- mononukleosis berjangkit;
- trichomoniasis;
- jangkitan virus papilloma;
- tuberkulosis;
- jangkitan herpes jenis 1 dan 2;
- helicobacteriosis;
- cytomegalovirus;
- difteria;
- salmonellosis;
- jangkitan HIV.
Selain itu, kaedah PCR digunakan dalam diagnosis kanser.
Faedah kaedah
Diagnostik PCR mempunyai beberapa kelebihan:
- Sensitiviti tinggi. Walaupun dengan kehadiran hanya beberapa molekul DNA mikroorganisma, analisis PCR menentukan kehadiran jangkitan. Kaedah ini akan membantu dengan penyakit kronik dan terpendam. Selalunya dalam kes sedemikian, mikroorganismasebaliknya tidak boleh ditanam.
- Sebarang bahan sesuai untuk penyelidikan, seperti air liur, darah, rembesan alat kelamin, rambut, sel epitelium. Yang paling biasa ialah analisis darah dan smear urogenital untuk PCR.
- Tiada pemangkasan jangka panjang diperlukan. Proses diagnostik automatik membolehkan anda mendapatkan hasil kajian selepas 4-5 jam.
- Kaedah ini hampir 100% boleh dipercayai. Hanya kes terpencil hasil negatif palsu telah direkodkan.
- Keupayaan untuk mengenal pasti beberapa jenis patogen daripada sampel bahan tunggal. Ini bukan sahaja mempercepatkan proses mendiagnosis penyakit, tetapi juga mengurangkan kos bahan dengan ketara. Selalunya doktor menetapkan analisis PCR yang komprehensif. Harga pemeriksaan, yang terdiri daripada penentuan enam patogen, adalah kira-kira 1,500 rubel.
Cadangan untuk menyediakan analisis
Untuk memastikan keputusan boleh dipercayai semasa kajian PCR, anda perlu mengambil ujian, mengikut cadangan untuk persediaan awal untuk diagnosis:
- Sebelum menderma air liur, anda harus menahan diri daripada makan dan mengambil ubat 4 jam sebelum pensampelan. Sejurus sebelum prosedur, bilas mulut anda dengan air masak.
- Peraturan di atas juga harus dipatuhi semasa mengambil sampel dari permukaan dalam pipi. Selepas membilas, disyorkan untuk melakukan urutan kulit yang ringan untuk menyerlahkan rembesan kelenjar.
- Urin biasanya dikumpul di rumah. Untuk melakukan ini, anda perlu menjalankan tandas yang telitikemaluan. Kumpulkan 50-60 ml air kencing dalam bekas plastik steril. Untuk memastikan ketulenan bahan, disyorkan untuk wanita memasukkan tampon ke dalam faraj, dan bagi lelaki untuk menarik balik lipatan kulit sebanyak mungkin. Jangan menderma semasa haid anda.
- Untuk menderma sperma, anda mesti menahan diri daripada melakukan hubungan seksual selama 3 hari sebelum pensampelan. Doktor juga menasihatkan supaya tidak melawat sauna dan mandi air panas, minum alkohol dan makanan pedas. Anda mesti menahan daripada membuang air kecil 3 jam sebelum ujian.
- Untuk mengambil smear urogenital, sebagai contoh, jika ujian PCR dilakukan untuk klamidia, kedua-dua wanita dan lelaki dinasihatkan untuk berehat selama 3 hari. Ubat antibakteria tidak boleh diambil 2 minggu sebelum analisis. Selama seminggu, anda perlu berhenti menggunakan gel intim, salap, suppositori faraj, douching. 3 jam sebelum peperiksaan, anda mesti menahan kencing. Semasa haid, pensampelan tidak dijalankan, hanya 3 hari selepas pemberhentian pelepasan darah, anda boleh mengambil smear urogenital.
PCR semasa mengandung
Sepanjang tempoh jangkaan bayi, banyak jangkitan kelamin amat berbahaya untuk perkembangan normal janin. STD boleh mencetuskan keterlambatan pertumbuhan dalam rahim, keguguran atau kelahiran pramatang, kecacatan kongenital kanak-kanak. Oleh itu, adalah sangat penting untuk menjalani pemeriksaan PCR pada awal kehamilan. Anda perlu lulus analisis semasa pendaftaran - sehingga 12 minggu.
Bahan diambil dari saluran serviks menggunakan berus khas. Prosedur ini tidak menyakitkan dan tidak mendatangkan bahaya kepada bayi. Biasanya semasa kehamilan, analisis dijalankan untuk klamidia dengan kaedah PCR, serta untuk ureaplasmosis, mycoplasmosis, sitomegalovirus, herpes, papillomavirus. Kompleks peperiksaan sedemikian dipanggil PCR-6.
PCR untuk diagnosis HIV
Disebabkan kaedah tindak balas rantai polimerase sangat sensitif terhadap perubahan dalam badan dan keadaan diagnosis, banyak faktor boleh mempengaruhi hasilnya. Oleh itu, analisis PCR untuk jangkitan HIV bukanlah kaedah yang boleh dipercayai, kecekapannya adalah 96-98%. Dalam baki 2-4% kes, ujian memberikan keputusan positif palsu.
Tetapi dalam sesetengah situasi, diagnostik PCR HIV sangat diperlukan. Ia biasanya diberikan kepada orang yang mempunyai keputusan ELISA negatif palsu. Penunjuk sedemikian menunjukkan bahawa seseorang belum lagi membangunkan antibodi kepada virus dan mereka tidak dapat dikesan tanpa peningkatan berganda dalam bilangan. Inilah yang boleh dicapai dengan menjalankan ujian darah PCR.
Diagnostik ini juga diperlukan untuk kanak-kanak tahun pertama kehidupan yang dilahirkan daripada ibu yang positif HIV. Kaedah ini adalah satu-satunya cara untuk menentukan status kanak-kanak dengan pasti.
PCR untuk mendiagnosis hepatitis
Kaedah tindak balas rantai polimerase membolehkan pengesanan DNA virus hepatitis A, B, C jauh sebelum pembentukan antibodi kepada jangkitan atau permulaan simptom penyakit. Analisis PCR untuk hepatitis C amat berkesan, kerana dalam 85% kes penyakit ini adalah asimtomatik dan tanparawatan tepat pada masanya memasuki peringkat kronik.
Pengesanan patogen tepat pada masanya akan membantu mengelakkan komplikasi dan rawatan jangka panjang.
Peperiksaan PCR Komprehensif
Analisis PCR yang rumit: apakah itu? Ini adalah pemeriksaan menggunakan kaedah tindak balas rantai polimer, yang merangkumi penentuan beberapa jenis jangkitan secara serentak: mycoplasma genitalium, mycoplasma hominis, gardnerella vaginalis, candida, trichomonas, cytomegalovirus, ureaplasma urealiticum, herpes jenis 1 dan 2, gonorea, papillomavirus. Harga diagnostik sedemikian berkisar antara 2000 hingga 3500 rubel. bergantung pada klinik, bahan dan peralatan yang digunakan, serta jenis analisis: kualitatif atau kuantitatif. Apa yang perlu dalam kes anda - doktor akan memutuskan. Dalam sesetengah kes, cukup untuk menentukan kehadiran patogen, pada yang lain, sebagai contoh, dengan jangkitan HIV, titer kuantitatif memainkan peranan penting. Apabila mendiagnosis semua patogen di atas, pemeriksaan dipanggil "analisis PCR-12".
Transkrip keputusan analisis
Mentafsir analisis PCR tidak sukar. Terdapat hanya 2 skala penunjuk - "hasil positif" dan "hasil negatif". Apabila patogen dikesan, doktor boleh mengesahkan kehadiran penyakit dengan kepastian 99% dan mula merawat pesakit. Dengan kaedah kuantitatif untuk menentukan jangkitan, lajur yang sepadan akan menunjukkan penunjuk berangka bakteria yang dikesan. Hanya doktor yang boleh menentukan tahap penyakit dan menetapkan rawatan yang diperlukan.
Dalam beberapa kes, contohnya, apabila menentukan jangkitan HIV melalui PCR, dengan keputusan negatif, pemeriksaan tambahan menjadi perlu untuk mengesahkan penunjuk yang diperolehi.
Di mana hendak diuji?
Di mana hendak mengambil ujian PCR: di klinik awam atau di makmal swasta? Malangnya, di institusi perubatan perbandaran, peralatan dan kaedah sering ketinggalan zaman. Oleh itu, adalah lebih baik untuk memberi keutamaan kepada makmal swasta dengan peralatan moden dan kakitangan yang berkelayakan tinggi. Di samping itu, di klinik swasta, anda akan mendapat keputusan dengan lebih cepat.
Di Moscow, banyak makmal swasta menawarkan analisis PCR untuk pelbagai jangkitan. Sebagai contoh, di klinik seperti Vita, Klinik Kompleks, Keluarga Bahagia, Uro-Pro, analisis PCR dijalankan. Harga peperiksaan adalah dari 200 rubel. untuk mengenal pasti satu patogen.
Boleh disimpulkan bahawa diagnosis penyakit berjangkit oleh PCR dalam kebanyakan kes adalah cara yang cepat dan boleh dipercayai untuk mengesan patogen dalam badan pada peringkat awal jangkitan. Tetapi masih, dalam kes tertentu, ia patut memilih kaedah diagnostik lain. Hanya pakar yang boleh menentukan keperluan untuk kajian sedemikian. Mentafsir analisis PCR juga memerlukan pendekatan profesional. Ikut nasihat doktor anda dan jangan ambil ujian yang anda tidak perlukan.
